[{"@context":"http:\/\/schema.org\/","@type":"BlogPosting","@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/dosage-immunosorbant-lie-a-lenzyme-wikipedia\/#BlogPosting","mainEntityOfPage":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/dosage-immunosorbant-lie-a-lenzyme-wikipedia\/","headline":"Dosage immunosorbant li\u00e9 \u00e0 l’enzyme – Wikipedia","name":"Dosage immunosorbant li\u00e9 \u00e0 l’enzyme – Wikipedia","description":"before-content-x4 Elisa transmet \u00e0 cet article. Des significations suppl\u00e9mentaires de “ELISA” peuvent \u00eatre trouv\u00e9es sous Elisa. Dosage immuno-enzymatique (ELISA) d\u00e9signe","datePublished":"2020-12-14","dateModified":"2020-12-14","author":{"@type":"Person","@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/author\/lordneo\/#Person","name":"lordneo","url":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/author\/lordneo\/","image":{"@type":"ImageObject","@id":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/44a4cee54c4c053e967fe3e7d054edd4?s=96&d=mm&r=g","url":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/44a4cee54c4c053e967fe3e7d054edd4?s=96&d=mm&r=g","height":96,"width":96}},"publisher":{"@type":"Organization","name":"Enzyklop\u00e4die","logo":{"@type":"ImageObject","@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/wiki4\/wp-content\/uploads\/2023\/08\/download.jpg","url":"https:\/\/wiki.edu.vn\/wiki4\/wp-content\/uploads\/2023\/08\/download.jpg","width":600,"height":60}},"image":{"@type":"ImageObject","@id":"https:\/\/upload.wikimedia.org\/wikipedia\/commons\/thumb\/e\/ea\/Disambig-dark.svg\/25px-Disambig-dark.svg.png","url":"https:\/\/upload.wikimedia.org\/wikipedia\/commons\/thumb\/e\/ea\/Disambig-dark.svg\/25px-Disambig-dark.svg.png","height":"19","width":"25"},"url":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/dosage-immunosorbant-lie-a-lenzyme-wikipedia\/","wordCount":4282,"articleBody":"     (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});before-content-x4 Elisa transmet \u00e0 cet article. Des significations suppl\u00e9mentaires de “ELISA” peuvent \u00eatre trouv\u00e9es sous Elisa. Dosage immuno-enzymatique (ELISA) d\u00e9signe une proc\u00e9dure de d\u00e9tection bas\u00e9e sur des anticorps ( Essai ). Comme le radio-immunasse (RIA), l’ELISA appartient au groupe de processus d’essai immunitaire, mais n’est pas bas\u00e9 sur une mesure de la radioactivit\u00e9, mais sur une r\u00e9action couleur enzymatique et est donc l’un des processus d’immunadsorption enzymatique (EIA). L’antig\u00e8ne \u00e0 d\u00e9montrer est initialement li\u00e9 et enrichi d’une plaque de microtite \u00e0 une plaque de microtite, un deuxi\u00e8me anticorps coupl\u00e9 enzymatique (synonyme: Anticorps de d\u00e9tection ) conduit ensuite \u00e0 la r\u00e9action d’un substrat de colorant.  Diff\u00e9rentes variantes de l’Elisa         (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});after-content-x4ELISA typique (sandwich \u00e0 double anticorps “anti-IgG”))        (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});after-content-x4\u00c0 l’aide de l’ELISA, des prot\u00e9ines (par exemple des anticorps) et des virus, mais aussi des compos\u00e9s mol\u00e9culaires faibles tels que les hormones, les toxines et les pesticides peuvent \u00eatre d\u00e9tect\u00e9s dans un \u00e9chantillon (s\u00e9rum sanguin, lait, urine, etc.). Ici, vous profitez de la propri\u00e9t\u00e9 d’anticorps sp\u00e9cifiques qui se lient (antig\u00e8ne) au mat\u00e9riau \u00e0 d\u00e9montrer. Un anticorps est auparavant marqu\u00e9 d’une enzyme. La r\u00e9action catalys\u00e9e par l’enzyme rapporteur sert de preuve de la pr\u00e9sence de l’antig\u00e8ne. Le substrat So-Called est mis en \u0153uvre par l’enzyme, le produit de r\u00e9action peut g\u00e9n\u00e9ralement \u00eatre d\u00e9tect\u00e9 par enveloppe de couleur, peut-\u00eatre \u00e9galement par chimioluminescence. La r\u00e9sistance du signal est fonction de la concentration d’antig\u00e8ne qui peut \u00eatre d\u00e9termin\u00e9e avec pr\u00e9cision avec un photom\u00e8tre, afin que ELISA puisse \u00e9galement \u00eatre utilis\u00e9 comme mesures multiples pour des preuves quantitatives.La peroxydase de raifort (HRP, d’Engl. peroxydase de raifort ), la phosphatase alcaline (AP) ou moins a \u00e9galement utilis\u00e9 la glucose oxydase (Dieu).Dans le cas de la phosphatase alcaline, substrat de colorant (synonyme: chromog\u00e8ne) z. B. p -Nitroph\u00e9nylphosphate (PNPP), tandis que dans la peroxydase principalement O -Ph\u00e9nylindiamine (OPD) est utilis\u00e9. La phosphatase alcaline divise le phosphate du phosphate de nitroph\u00e9nyle incolore et il surgit p -Nitroph\u00e9nol, qui est un jaune faible. Le changement de concentration du colorant cr\u00e9\u00e9 par la r\u00e9action enzymatique peut \u00eatre suivi avec un photom\u00e8tre selon la loi Lambert-Beer. L’intensit\u00e9 de la couleur augmente avec la concentration du nitroph\u00e9nol r\u00e9sultant et donc la concentration de l’antig\u00e8ne \u00e0 d\u00e9terminer dans l’\u00e9chantillon par rapport \u00e0 une s\u00e9rie de dilution avec des concentrations connues ( S\u00e9rie standard ). Le pr\u00e9curseur des Elisas est l’essai radio-immunmuno depuis 1960. [d’abord] Le couplage direct des prot\u00e9ines \u00e9tait n\u00e9cessaire pour des preuves enzymatiques afin que le signal du rapporteur ne se produise que coupl\u00e9 \u00e0 l’anticorps de liaison sp\u00e9cifique. Le couplage chimique des prot\u00e9ines a \u00e9galement \u00e9t\u00e9 d\u00e9velopp\u00e9 par Stratis Avrameas et G. B. Pierce. [2] L’adsorption des prot\u00e9ines sur les surfaces avait d\u00e9j\u00e0 \u00e9t\u00e9 examin\u00e9e par Jerker Porath en 1966. [3] L’ELISA a \u00e9galement \u00e9t\u00e9 d\u00e9velopp\u00e9e en 1971 par deux groupes de travail, dont Peter Perlmann et Eva Engvall en Su\u00e8de. [4] [5] Au lieu d’un anticorps de d\u00e9tection coupl\u00e9 enzymatique, la combinaison d’un anticorps de d\u00e9tection non nupul\u00e9 et d’un (troisi\u00e8me) anticorps secondaire (troisi\u00e8me) ( secondaire Parce que c’est un anticorps contre les anticorps, l’anglais. anticorps secondaire ), \u00e0 laquelle une enzyme \u00e9tait li\u00e9e (voir Fig.). Cela n\u00e9cessite une autre \u00e9tape d’incubation et de lavage. Le tampon TBS-T est principalement utilis\u00e9 comme tampon. Bien que plus complexe, l’utilisation d’un conjugu\u00e9 d’anticorps secondaire a l’avantage que le co\u00fbt de la fabrication de nombreux anticorps primaires coupl\u00e9s enzymes diff\u00e9rents, qui ne sont sp\u00e9cifiques que pour un antig\u00e8ne, peuvent \u00eatre \u00e9vit\u00e9s. Les anticorps secondaires d\u00e9coupl\u00e9s enzymatiques utilis\u00e9s, qui peuvent \u00e9galement \u00eatre li\u00e9s \u00e0 toute la bouillie initiale d’une esp\u00e8ce comme anticorps polyclonal avec divers \u00e9pitopes dans la r\u00e9gion constante (r\u00e9gion FC), peuvent \u00eatre utilis\u00e9s plus larges et conduire \u00e0 un renforcement du signal. De plus, les anticorps secondaires-conjugu\u00e9s en \u00e9zyme peuvent \u00eatre utilis\u00e9s par une esp\u00e8ce pour une vari\u00e9t\u00e9 de tests A immunitaire diff\u00e9rents en raison de la sp\u00e9cificit\u00e9 des r\u00e9gions FC d’un type d’anticorps, de sorte que les anticorps secondaires sont un produit de production de masse industriel plus efficace.Un autre renforcement du signal fr\u00e9quent peut \u00eatre effectu\u00e9 en liant les conjugu\u00e9s de streptavidine ou d’avidine aux anticorps de d\u00e9tection biotinyl\u00e9s dans la derni\u00e8re \u00e9tape d’incubation. La d\u00e9tection avec le conjugu\u00e9 de l’enzyme d’avidine (stress) conduit \u00e9galement \u00e0 un renforcement du signal en raison de plusieurs biotinylation des anticorps primaires et de la liaison r\u00e9sultante de plusieurs mol\u00e9cules de reporter. En utilisant la fluorescence ou la r\u00e9action en cha\u00eene par polym\u00e9rase, les syst\u00e8mes de rapporteurs modernes permettent parfois des sensibilit\u00e9s plus \u00e9lev\u00e9es (par exemple Immuno-PCR) ou des dispositions parall\u00e8les dans une approche ( Multiplex ), mais ne sont pas des elisas au sens plus stricte. [6]        (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});after-content-x4Avec cette enzyme-coupl\u00e9e immunitaire adsorption Tester (eia) L’antig\u00e8ne est directement et sans un rev\u00eatement de rev\u00eatement Adsorb\u00e9 sur la surface du polystyr\u00e8ne d’une plaque de microtite, ce qui signifie que les concentrations d’anticorps peuvent \u00eatre mesur\u00e9es ci-dessous par rapport \u00e0 une s\u00e9rie standard.  Sandwich Elisa . (d’abord) manteau -Tidies, li\u00e9es au bas de la plaque de microtite (non repr\u00e9sent\u00e9e); (2) ajout de l’\u00e9chantillon et incubation; (3) addition de l’anticorps de d\u00e9tection; (4) ajout et formation complexe du enzymatique Anticorps – antig\u00e8nes – anticorps; (5) Ajout d’un substrat qui correspond \u00e0 l’enzyme, qui est impl\u00e9ment\u00e9e dans un produit de r\u00e9action d\u00e9tectable. L’une des techniques ELISA ( Sandwich-elisa ou Antig\u00e8ne-elisa ) Utilisez deux anticorps (AK), qui sont tous deux sp\u00e9cialement li\u00e9s \u00e0 l’antig\u00e8ne \u00e0 d\u00e9montrer. Il est important que les deux anticorps se lient \u00e0 l’antig\u00e8ne \u00e0 diff\u00e9rents endroits (\u00e9pitopes), sinon ils se g\u00eaneraient. Le premier anticorps (anglais anticorps envelopper ou anticorps de capture ) est \u00e0 une phase fixe (principalement des plaques de microtite avec 96 puits les d\u00e9pressions mentionn\u00e9es). L’\u00e9chantillon avec l’antig\u00e8ne \u00e0 prouver est alors dans le puits donn\u00e9 et incub\u00e9 pendant un certain temps. Pendant ce temps, l’anticorps li\u00e9 \u00e0 la plaque se lie \u00e0 l’antig\u00e8ne de l’antig\u00e8ne dans l’\u00e9chantillon. Une fois la phase d’incubation expir\u00e9e, la plaque est lav\u00e9e: les composants non li\u00e9s de l’\u00e9chantillon sont supprim\u00e9s, et il ne reste que ce manteau -Tibodies Antig\u00e8ne li\u00e9. Un deuxi\u00e8me anticorps de d\u00e9tection non marqu\u00e9 primaire est ajout\u00e9 pour terminer le sandwich. Les anticorps de d\u00e9tection en exc\u00e8s sont \u00e0 nouveau lav\u00e9s en lavant l’assiette. Le r\u00e9sultat peut \u00eatre quantifi\u00e9 en ajoutant un anticorps secondaire marqu\u00e9 qui se lie au deuxi\u00e8me anticorps primaire et catalyse la r\u00e9action de couleur enzymatique. [7] Pour des preuves quantitatives, une s\u00e9rie avec des concentrations d’antig\u00e8nes connues ( S\u00e9rie standard ) r\u00e9alis\u00e9e pour obtenir une courbe d’\u00e9talonnage pour le signal mesur\u00e9 (extinction optique, intensit\u00e9 \u00e9mise). Souvent, cependant, le Immunassage komp\u00e9titif (Test d’immunadsorption coupl\u00e9e enzymatique, EIA) Utilis\u00e9. Aucune seconde, un anticorps marqu\u00e9 est utilis\u00e9 pour la d\u00e9tection, mais un antig\u00e8ne concurrent marqu\u00e9 (une connexion synth\u00e9tique qui est structurellement similaire aux analytes et se lie \u00e9galement \u00e0 l’anticorps). Il y a donc une comp\u00e9tence (comp\u00e9tition) entre l’analyt et le concurrent autour d’un lieu de liaison sur l’anticorps. Inversement, le signal concerne la concentration d’analyse: peu d’analyse = presque tous les lieux d’anticorps sont occup\u00e9s par des concurrents marqu\u00e9s = forte r\u00e9action couleur; Beaucoup d’analyses = r\u00e9action de couleur faible.Les syst\u00e8mes de preuve utilis\u00e9s (enzymes \/ substrats) sont g\u00e9n\u00e9ralement les m\u00eames que dans l’ELISA.  Une forme d’angle sigmo\u00efde se produit lorsque vous appliquez le logarithme de concentration sur l’axe x et l’extinction (= OD = densit\u00e9 optique = absorption) sur l’axe y. Cette forme de repr\u00e9sentation est le diagramme semi-logarithmique. Afin de pouvoir calculer une r\u00e9gression lin\u00e9aire, vous devez lin\u00e9ariser ces sigmo\u00efdes au pr\u00e9alable. \u00c0 cette fin, la dimension de l’axe x est maintenue et l’axe y se calcule en valeurs logit. Une ligne droite doit \u00eatre cr\u00e9\u00e9e. Cette forme de pr\u00e9sentation est appel\u00e9e Logit-Logit-Plot, Logit-Log-Plot ou Logit-Plot. Afin de pouvoir calculer les valeurs logit \u00e0 partir des valeurs d’extinction, vous devez d’abord normaliser les valeurs d’extinction (w) afin qu’elles couvrent une zone de 0 \u00e0 1. Pour ce faire, vous avez besoin de l’asymptote inf\u00e9rieure (U) et sup\u00e9rieure (O) de la courbe sigmo\u00efde. n = w\u2212uo\u2212u{DisplayStyle n = {frac {w-u} {o-u}}} Fonction d’inversion: Dans = dans + n \u22c5 ( O – dans ) {DisplayStyle w = u + ncdot (o-u)} Ces valeurs d’extinction normalis\u00e9es entrent ensuite dans l’\u00e9quation logit (L): L = LN \u2061 ( n1\u2212n) {displayStyle l = ln Left ({frac {n} {1-n}} droit)} Fonction d’inversion: n = eL1+eL{DisplayStyle n = {frac {e ^ {l}} {1 + e ^ {l}}}}} Les paires de valeurs du trac\u00e9 logit-log \u00e0 partir de la valeur x (= logarithme naturel de concentration) et la valeur y (logit des valeurs d’extinction normalis\u00e9es (L)) entrent ensuite dans le calcul de la r\u00e9gression lin\u00e9aire. Cela offre ensuite la hauteur (a) et la pente (b) de la ligne droite: et = un + b \u22c5 X {displaystyle y = a + bcdot x} Fonction d’inversion: X = y\u2212ab{displayStyle x = {frac {y-a} {b}}} Pour l’interpolation de valeurs mesur\u00e9es inconnues sur la courbe d’\u00e9talonnage cr\u00e9\u00e9e de cette mani\u00e8re, souvent mal appel\u00e9e une courbe d’\u00e9talonnage, les fonctions d’inversion sont alors n\u00e9cessaires. La plus haute pr\u00e9cision est atteinte pr\u00e8s du tournant au milieu du sigmo\u00efde, car sa mont\u00e9e est la plus grande \u00e0 ce stade. La moindre pr\u00e9cision se produit pr\u00e8s de vos asymptotes. Si vous pouvez calculer une courbe de mesure \u00e0 partir de plusieurs mesures diff\u00e9rentes \u00e0 l’aide des asymptrit\u00e9s de la courbe d’\u00e9talonnage, c’est la plus pr\u00e9cis\u00e9ment si vous comparez la concentration de point de paragraphe de la courbe d’\u00e9talonnage avec l’\u00e9clairage du point de tournant de la courbe de mesure. Les asymptrit\u00e9s des courbes de mesure sont ignor\u00e9es car tous les r\u00e9sultats de mesure doivent \u00eatre r\u00e9f\u00e9r\u00e9s au tournant de la courbe d’\u00e9talonnage, qui peut \u00eatre trouv\u00e9 dans les valeurs y n = 0,5 dans le diagramme semi-\u00e9migarithmique, identique \u00e0 L = 0 dans le trac\u00e9 logit logit. Avec la repr\u00e9sentation semi-conductrice de la courbe de mesure, le logarithme naturel de la dilution de la dilution sert d’axe x, car la concentration est encore inconnue pour les valeurs mesur\u00e9es avant le calcul. En principe, il est \u00e9galement possible \u00e0 la place des logarithmes naturels LN Pour utiliser les logarithmes d\u00e9cadicaux ou ceux avec la base de 2. Au lieu de la dilution, seule la dilution (dilution) peut \u00eatre utilis\u00e9e. Il est \u00e9galement permis de calculer la valeur de n que de 0 \u00e0 100%, \u00e0 condition que les \u00e9quations soient modifi\u00e9es correctement. Cependant, il ne serait pas correct de calculer la logit directement \u00e0 partir des valeurs d’extinction non normalis\u00e9es W. R. A. Goldsby, T. J. Kindt, B. A. Osborne, J. Kuby: Dosage immuno-enzymatique. Dans: Immunologie. 5e \u00e9dition. W. H. Freeman, New York 2003, ISBN 0-7167-4947-5, pp. 148-150. \u2191  R. Yalow, S. Personne: Immunodosage de l’insuline plasmatique endog\u00e8ne chez l’homme . Dans: J. Clin. Investir . 39e ann\u00e9e, Non.  7 , 1960, S.  1157\u20131175 , est ce que je: 10.1172 \/ jci104130 , PMID 13846364 , PMC 441860 (Texte complet gratuit).   \u2191  R. Lequin: Immunoessai enzymatique (EIA) \/ test immuno-enzymatique (ELISA) (ELISA) . Dans: Clinquant Chem . 51e ann\u00e9e, Non.  douzi\u00e8me , 2005, S.  2415\u20132418 , est ce que je: 10.1373 \/ CLINCHEM.2005.051532 , PMID 16179424 .   \u2191  L. large, Jerker Porath: Radio-immuno-essai des prot\u00e9ines avec l’utilisation d’anticorps coupl\u00e9s par Sephadex. 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Consult\u00e9 le 12 mai 2018 .        (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});after-content-x4"},{"@context":"http:\/\/schema.org\/","@type":"BreadcrumbList","itemListElement":[{"@type":"ListItem","position":1,"item":{"@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/#breadcrumbitem","name":"Enzyklop\u00e4die"}},{"@type":"ListItem","position":2,"item":{"@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2fr\/wiki1\/dosage-immunosorbant-lie-a-lenzyme-wikipedia\/#breadcrumbitem","name":"Dosage immunosorbant li\u00e9 \u00e0 l’enzyme – Wikipedia"}}]}]