[{"@context":"http:\/\/schema.org\/","@type":"BlogPosting","@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2it\/wiki29\/2020\/03\/02\/x-gal-wikipedia\/#BlogPosting","mainEntityOfPage":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2it\/wiki29\/2020\/03\/02\/x-gal-wikipedia\/","headline":"X -Gal – Wikipedia","name":"X -Gal – Wikipedia","description":"Da Wikipedia, Liberade Libera. 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X-gal (abbreviato anche in Bcig per bromo-cloro-indolil-galattopiranoside) \u00e8 un composto organico consistente in una molecola di galattosio legata ad un indolo sostituito. \u00c8 ampiamente utilizzato in biologia molecolare. Clonaggio [ modifica | Modifica wikitesto ” Nel clonaggio genico, l’X-gal \u00e8 utilizzato per indicare quando una cellula esprime l’enzima \u03b2-galattosidasi, che \u00e8 codificato dal gene lacZ, in una tecnica chiamata screening bianco-blu. L’X-gal viene scisso dalla \u03b2-galattosidasi producendo galattosio e 5-bromo-4-cloro-3-idrossindolo. Quest’ultimo \u00e8 quindi ossidato in 5,5′-dibromo-4,4′-dicloro-indaco, un composto blu insolubile.  Quindi, se dell’X-gal ed un induttore della \u03b2-galattosidasi (molto utilizzato \u00e8 l’IPTG) sono aggiunti ad un terreno a base di agarosio in una piastra di coltura, le colonie batteriche con un gene “lacZ” funzionale possono essere distinte dalle altre.   Quando una tecnica per clonare geni tramite vettori plasmidici inseriti in cellule batteriche risulta ottimale, l’X-gal \u00e8 utilizzato per localizzare visivamente le colonie di lieviti o di Escherichia coli che sono state trasformate dal vettore plasmidico desiderato in uno Screening Bianco-Blu .I batteri E. coli, che non sono in grado di produrre l’ pesante  \u03b2-Galattosidazione (codificata dal gene lacZ dell’operone lac), vengono trasformati dall’assorbimento del vettore plasmidico, che contiene un inserti nella regione codificante del gene lacz .  Una volta trasformati, i batteri aventi un plasmide risultano in grado di produrre l’enzima \u03b2-galattosidasi che pu\u00f2 scindere l’X-gal presente nel terreno a base di agar, dando luogo a delle colonie blu.  Le colonie batteriche originate da cellule non trasformate non riescono a scindere l’X-gal, per cui rimangono bianche. I vettori plasmidici possono anche essere codificati per bloccare diversamente la produzione di \u03b2-galattosidasi portando le colonie trasformate a sviluppare una colorazione bianca, che diventa blu solo nel caso non portino il plasmide. \u00c8 il caso di molti vettori di clonazione presenti sul mercato, come il pGem-T Vectors della Promega, che porta lacz \u03b1, una forma troncata del gene della \u03b2-galattosidasi, e richiede specifici ceppi di E. coli (come DH5\u03b1) per ottenere \u03b1-complementazione.  “Reporter” [ modifica | Modifica wikitesto ” Il gene lacz pu\u00f2 essere utilizzato come “reporter” in combinazione con mezzi di coltura contenenti X-gal. Nell’analisi del Doppio Ibrido per esempio, \u00e8 fondamentale per distinguere tra quali lieviti oppure batteri vi sia stata un’interazione fruttuosa, che porta al legame tra un promotore ed un dominio di attivazione, ed in quali cellule invece questo non sia avvenuto.Se il promotore si \u00e8 legato ad un gene lacz , la produzione di \u03b2-galattosidasi sar\u00e0 indicata dalla produzione di pigmento blu da parte delle colonie che hanno avuto una interazione fruttuosa. [2] A causa della sua esecuzione manuale, questa tecnica si utilizza solitamente nelle situazioni in cui il numero di colonie che devono essere distinte \u00e8 minore di 10 6 . [2] L’avvenuta scissione dell’X-gal produce anche una forte puzza dovuta alla volatilizzazione dell’indolo. Analisi dell’acqua [ modifica | Modifica wikitesto ” Oltre all’uso in biologia molecolare, l’X-gal \u00e8 utilizzato per determinare il contenuto in Escherichia coli ed altri coliformi in campioni di acqua potabile.   ^  Sigma Aldrich; Rev. Del 27.04.2012  ^  UN B  Joung J, Ramm E, Pabo C, Un sistema batterico di selezione a due ibridi per lo studio delle interazioni proteina-DNA e proteina-proteina , In Proc Natl Acad Sci USA , vol. 97, n. 13, 2000, pp. 7382\u20137, doi: 10.1073\/pnas.110149297 , PMC 16554 , PMID 10852947 .     "},{"@context":"http:\/\/schema.org\/","@type":"BreadcrumbList","itemListElement":[{"@type":"ListItem","position":1,"item":{"@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2it\/wiki29\/#breadcrumbitem","name":"Enzyklop\u00e4die"}},{"@type":"ListItem","position":2,"item":{"@id":"https:\/\/wiki.edu.vn\/all2it\/wiki29\/2020\/03\/02\/x-gal-wikipedia\/#breadcrumbitem","name":"X -Gal – Wikipedia"}}]}]