免疫マーク – ウィキペディア

免疫マーク （また 免疫 – また 抗体着色 呼ばれた）は、免疫ハウスを結合することにより分子を検出するための生化学的方法です。

免疫市場は分子マーキングの方法であり、証明システムでマークされた抗体または断片を使用します。免疫マーカーは、ビオチン、放射性同位体、レポーター酵素、オリゴヌクレオチド、またはフルオロフォアをシグナル分子（レポーター）として使用します。これは証拠として機能します。証拠は、抗原抗体反応としての特定の組織特性（エピトップ）に対する抗体の親和性に基づいています。理想的には、抗体とエピトップの間に特異的かつ強い結合があります。抗体は、調製中にその存在を見えるようにする検出システムと結びついています。さまざまな検出システムを使用すると、少量のエピトップがますます表示される可能性があります。目標は、エピトップの場所（そしてそこにのみ）の信号を十分な強さで識別することです。

発見されるように指示された抗体は、一次抗体と呼ばれます。抗体は、高い特異性と親和性によって特徴付けられるべきであり、同様のエピトープとの交差反応を示さないでください。マルチステッププロセスでは、検出システムの個々のコンポーネントが準備に提供されます。そのため、免疫組織化学（IHC）が比較的長く、エラーが発生しやすい理由です。結果は、固定の種類、固定、埋め込み方法、準備の前処理方法（抗原網）などの影響を受ける可能性があります。したがって、テスト実装の標準化を求める必要があります。抗原抗体反応は、温度、濃度、インキュベーション期間、扇動、および最適な反応環境（pH値、塩濃度）に依存します。 TBS-Tバッファーは、主に結合抗体または免疫症のためのバッファーとして使用されます。

これらの変数を可能な限り一定に保ち、実験室の大きなサンプルボリュームを編集できるようにするために、異なる設計のIHCマシンが導入されました。免疫組織化学は、常に形態学的な文脈で評価されます。ヒンドルは、非特異的反応と一般的な背景色（内因性ペルオキシダーゼ、内因性ビオチン）を証明できます。
弱い信号のみが検出可能な場合、さまざまな方法（TSAなど）（信号増幅）によって強化できます。

直接的な方法 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

免疫組織化学（直接的な方法）

検査される抗原（=タンパク質）は、蛍光性、ローダミン、テキサスなどの酵素または蛍光剤と直接リンクされた（共役）特定の抗体を使用して定義された条件下でまとめられます。抗体（したがって酵素）は抗原に結合し、非結合抗体がすすいでいます。さらなるステップでは、酵素は染料を使用して酵素と反応する基質を提供されます。この染料は、イムチック化学反応が起こって見える場所で形成されます。
簡単な方法で表現されています： 酵素 +基質/クロモン→色による抗原 +抗体→

蛍光色素マーク抗体の場合、検出は蛍光顕微鏡で直接起こります。直接免疫蛍光（DIF）は、調製における異なる抗原の複数の表現にも適しています。ここでは、異なる特異性の抗体は、異なる発光波長の蛍光色素と結合しています。 DIFは、最も古い免疫組織化学技術を表し、1950年代に初めて使用されました。

間接的な方法 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

免疫組織化学（間接的な方法）

BVDVの複製複合体の免疫蛍光記録。一次抗体に結合し、酵素と結合した二次抗体は赤く見えます。 （間接的な方法）

最初のステップでは、間接免疫蛍光（IIF）とも呼ばれるこの方法では、特定の組織/細胞に特定の抗体（一次抗体）が適用されます。 2番目のステップでは、抗体が最初の抗体に適用されます。ここでは酵素と結合され、酵素基質反応で色を引き起こすのは、いわゆる二次抗体です。別の可視染料が作成されます。

単に： 抗原 +一次抗体 +酵素 +基質/クロモーゲン→色による二次抗体→色

間接的な方法は、2段階の方法として、および3段階の方法として利用できます。 3段階の方法では、酵素と結合した別の抗体（=三次抗体）が追加されます。これは二次抗体に結合します。このステップは、信号補強に役立ち、少量のエピトップを表示するかどうかは理にかなっています。

間接的な技術は、抗Neutrophilic細胞質抗体（ANCA）などのCAR抗体などの内因性抗体を検出するためにも使用されます。または、これらの自己抗体を調べる患者血清を含み、テスト組織に適用されます。肯定的な結果が発生した場合、二次抗体（通常、ここではフルオロクロムと結合されています）は、その付着パートナーを見つけます。

教皇とAPAAP法 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

これらの方法では、ペルオキシダーゼ抗ペロキシダーゼ（ペルオキシダーゼ抗ペロキシダーゼ法）またはアルカリ – ホスファターゼ – アンチ – アルカリ – ホスファターゼ複合体からの名前があり、二次AKの後にここで適用されます。複合体は、3つの分子酵素と酵素に向けられた2つの抗体（一次AKと同じ種から）で構成されています。二次AKは、一次AKと教皇の複合体の間の橋として機能します。この方法では、前任者の方法よりも感度の増加とバックグラウンドカラーリングが低下し、1980年代に研究所での日常的な使用のための「キット」として導入されました。

ラベル付き（ストレプト）アビジン – ビオチン – メソード（LSAB） [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

今日、この着色方法が最も使用されています。原理は、ストレプトアビジンの高い親和性に基づいています（ Streptomyces avidinii ）およびビオチン用のアビジン（鶏の卵白）。ストレプトアビジンとアビジンには、それぞれビオチン用の4つの結合部位があります。

試薬の順序： 非共役原発性抗体 +ビオチンマーク（=ビオチン化）二次抗体 +アビジン – ビオチン – 酵素ジャガット +基質/クロモゲン→色。

ポリマー法 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

ここでは、一次AK（直接M.）または二次AK（間接M.）には、1つ以上のポリマー分子（デキストランまたはポリペプチド）が装備されています。これらのポリマーは、可能な限り多くの酵素でマークされており、それが基質とクロモゲンの実装を引き起こします。これにより、抗原の位置で染色が増加します。利点は、「内因性ビオチン」として背景色を引き起こす可能性のあるビオチンを使用する必要がないことです。この方法は通常、LSABよりも敏感で高速です。欠点は分子サイズにあり、組織に持ち込まれ、結合位置で立体障害につながる可能性があります。

一 二重免疫マーク また 二重免疫色 2つの抗体または免疫シェードを使用した検査テストでの2つのエピトープの視覚化について説明します。免疫覆いのほとんど、放射性同位体（短命のαまたはβスポットライト）、貴金属またはフルオロフォアのコロイドは、ヘテロビフ官能ネットワーク因子を介して抗体に直接直接リンクします。 ^[初め]

サンプルは例えばB.ウエスタンブロット、フローサイトメトリーの細胞、透過電子顕微鏡調製または免疫組織化学的、または免疫蛍光色の薄いカットによる。二重マーキングは、ウイルス学的診断の過程でも使用されます。

直接色 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

二重免疫色の場合、2つの異なるエピトープに向けられた2つの抗体を備えたサンプルが最初にインキュベートされます。抗体がそれぞれレポーター酵素を備えたこのエピトープにリンクされている場合、直接マーキングについて話します。間接的なマーキングの場合、求められているエピトープに対する指示された抗体は、それ以来、免疫症が使用されていたため、一次抗体と呼ばれます。

間接着色 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

原発性抗体と免疫溶液を介した間接マーカーを使用すると、追加の洗浄ステップと免疫科学のジュガン酸塩リンクが必要です。この目的のために、シグナル補強は、抗体のF（C）フラグメント上のいくつかのエピトープに向けられた免疫輝度の使用によって行われ、原発抗体に多くのレポーター分子をグループ化しました。さらに、免疫ジュゲートモジュラーは、種のすべての一次抗体に使用できます。これにより、各一次抗体のレポーター分子との結合が回避され、コストが削減されます。 2つの異なる間接着色（別々の一次抗体とレポーター酵素を含む免疫症）が同時に使用される場合、2つの異なるタイプの2つの一次抗体を使用して、免疫のある2つのシグナルを区別します。異なるレポーター酵素が主に使用されています。同様に、連続二重免疫色はペルオキシダーゼコンジュゲートでのみ実行することもできます。ペルオキシダーゼは、最初の色の後に希釈ナトリウム酸溶液で不活性化され、アンバウンドアジドナトリウムを洗い流し、ペルオキシダーゼ類似物で再び色付けします。

レポーター酵素 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

レポーター酵素として、z。 B.西洋わさびペルオキシダーゼ（TMB、DAB、ABTS、AECを使用して、Luminolとの化学発光の形式）およびアルカリホスファターゼ（BCIPおよびNBTまたはNAPHTOL-AS-MX-loshateおよび高赤色TRを含む）。さまざまな沈殿する色反応は、シリアル方法で実行されます。

フルオロフォア [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

蛍光複数のマーキングの場合、フルオロフォアが選択され、励起波長と放射波長の領域が可能な限り離れています。これは過剰になります かぶせる 蛍光検出器の他の色チャネルの蛍光と必要な蛍光補償が減少し、信号強度の損失につながり、したがって検出限界が上昇します。

異なる染料は、とりわけ、その色と溶解度が異なります。免疫組織化学とウエスタンブロットでは、ほとんどが沈殿する染料が使用されますが、可溶性染料はELISAに好まれます。

ペルオキシダーゼ（ポッド、西洋ワサビペルオキシダーゼHRP） [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

ペルオキシダーゼ（通常は西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ）は、基質として過酸化水素を提供されます。遊離陽子は、水の形成を伴う色付きの最終製品のために、以前はほぼ無色のクロモゲンを酸化します。

アルカリホスファターゼ（AP） [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

有機リン酸化合物は、アルカリホスファターゼの基質として提供されます。 APはリン酸を分割し、放出された接続は色のついた最終製品に反応します。

放射性同位体 [ 編集 | ソーステキストを編集します ]

放射性同位体は、分子マーカーの過程で抗体に結合され、カーX線撮影またはシンチレーションカウンターによるタンパク質の洗浄後に記録されます。

1. ↑ R.レクイン： 酵素免疫測定法（EIA）/酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA） 。の： クリン。化学。 バンド 51 、 いいえ。 12番目 、2005年、 S. 2415–2418 、doi： 10.1373/Clinchem.2005.051532 、 PMID 16179424 。