vektordesign – ウィキペディア

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用語 ベクター設計 遺伝子工学では、ベクターの標的適応（一般的に意味）は、DNAの重複の分子生物学的方法で説明しています。プラスミドPBR322は、1977年に自然に発生するプラスミドから開発されました。その結果、このプラスミドおよび他のプラスミドは、Vectord設計の過程で減少し、新しい抗生物質耐性と複製都市ジャンプを提供しました。最も頻繁に修正されたセクションには、多くの場合、多くの人がプラスミドで1回しか発生しない領域が含まれています（多くの場合） 個性的 ）制限酵素検出ポイント、複数のクローニングポイント（ MCS 、 複数のクローニングサイト ）、ポリラーとも呼ばれます。外来DNAの複製（増幅）の目的を除いて、DNA分子の標的設置を提供します。組換えタンパク質、コーディングまたは非コードリボ核酸およびそれらのタンパク質を産生する 試験管内で また 無駄に アプリケーションが宣伝されています。
これは、たとえば、ワクチン（一時的なベクターやDNAワクチンなど）、一時的なトランスフェクション、または腫瘍溶解性ウイルスなどの一時的な目的、および遺伝子療法や遺伝子修飾生物の生成などの一時的な目的で行われます。

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製造中の生物または細胞型は、必ずしもベクターの標的生物ではありません。 シャトルベクトル 「Pendula Vector」、例えばB.真核生物発現カセットを伴うプラスミド、細胞培養での包装のためのウイルスベクター）。したがって、多くの場合、両方のタイプのホストに適応が行われます。

遺伝子発現を増やすために、タンパク質をコードするシーケンスの外側のDNAセクションも変更されます。プロモーター、エンハンサー、ターミネーターの選択は、発現量を増やすことができます。 [初め] [2] タンパク質発現に使用される種で使用できる場合。哺乳類、細菌、考古学には明らかな違いがあります。 [3] [4] [5] 同様に、ベクトルシップ設計は、クローニングベクトルとしてまたは発現ベクターとしての使用に基づいています。

真核生物の場合、Kernexportシーケンスは、サイトゾルのRNA濃度を増加させる可能性があり、したがって、そこのリボソームを介した発現量を増加させることができます。 [6] さらに、リボソーム上のmRNAの検出は、コザックシーケンスによって改善できます。 [7] mRNAの早期の減少は、ポリアジル化シグナルと3 ‘末端でauuUAシーケンスを回避することで減少させることができます。 [8] Polylinerのモジュラー特性は、制限酵素の検出シーケンスの挿入または削除によって変更できます。時には、モジュール式の交換可能な発現カセットが使用されます。これにより、相同組換えまたはRMCEカセット交換プロセスを介した交換が可能になります。いくつかのタンパク質、いくつかのベクトル、1つのベクターのいくつかのオペロン、IRES、Inteine、または2Aペプチドの発現中に使用できます。

プラスミドベクターの複製は、複製の右側に1つ以上の複製を挿入することにより、いくつかの方法で拡張できます。 B.結合細胞のプラスミドで。

タンパク質コーディングシーケンスの変化は、通常、Vectord設計と並行して実行されます。の過程で Proteindesigns 例えばB. by コドンの最適化 式カセットが発現率を増加させるか、他の特性が変更されます。 [9]

ベクターの重要な要件は、人間に関連する生物学的保護レベルによって特徴付けられる生物への適用の安全性です。保護レベルの分類は、特に複製の可能性によって決定されている病原性に分類され、ゲノムの永続的な変化（挿入は腫瘍の発達を支持します）、および感染性と症状によって。

過度の免疫応答を避けるために、製造関連のピロゲンは、細菌生成されたベクターで検査されます。同様に、選択に使用される抗生物質耐性耐性耐性遺伝子は、プラスミドの微生物に移されません（例：皮膚植物、経口植物、腸内細菌叢など）。したがって、補助栄養素を使用してトランスジェニック生物を選択するか、その後耐性遺伝子を除去します。

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ウイルスベクターでは、複製に必要ないくつかの遺伝子は削除によって除去されるため、この遺伝子が事前に受け取った細胞株を補完することによってのみ生産が行われます。これは複製欠陥と呼ばれます。同様に、トロピズムの受容体の変化は、仮名タイピングの過程で制限または変更することができます。細胞型特異的プロモーターの使用は、遺伝子発現の局所的な制限を達成できます。

遺伝子工学法が開発される前に、攻撃によるウイルスのセキュリティの増加が達成されました。これらの生きているワクチンには、例えばB.ワクシニアウイルスに基づいて、ポリオムエル炎または天然poワクチン、MVAおよびNYVACに対する嚥下。

  1. ↑ J. Y. Qin、L。Zhang、K。L。Clift、I。Hulur、A。P。Xiang、B。Z。Ren、B。T。Lahn：構成的プロモーターとドキシサイクリン誘導性プロモーターの体系的な比較。の： PLOS 1。 2010、バンド5、NR。 5、記事E10611、 PMID 20485554 、 PMC 2868906 （無料の全文）。
  2. ↑ J. Blazeck、H。S。Alper： プロモーターエンジニアリング：最も基本的なレベルでの転写の制御における最近の進歩。 の： Biotechnology Journal。 2012、doi： 10.1002/biot.201200120 、 PMID 22890821 。
  3. ↑ Z. L. Xu, H. Mizuguchi, A. Ishii-Watabe, E. Uchida, T. Mayumi, T. Hayakawa: アデノウイルスベクターによる導入遺伝子発現の転写調節要素の強度評価。 の： コントロールリリースのジャーナル。 2002年、バンド81、nr。 1-2、S。155-63、 PMID 11992688 。
  4. ↑ J. C.サミュエルソン： 困難なタンパク質発現の最近の開発：大腸菌株、プロモーター、および関連する宿主変異のガイド。 の： 分子生物学の方法。 2011年、バンド705、S。195–209、 PMID 21125387 。
  5. ↑ S.バークナー、G。リップス： Sulfolobus spp。：ベクターと最初のアプリケーションの遺伝子ツール。 の： 微生物学のアーカイブ。 2008年、バンド190、nr。 3、S。217-30、 PMID 18542925 。
  6. ↑ J. E. O. E.リーブ、J。J。ラスト： Woodchuck肝炎ウイルスには、転写後の三者の調節要素が含まれています。 の： Journal of Virology。 1998、バンド72、nr。 6、S。50585-92、 PMID 9573279 、 PMC110072 （無料の全文）。
  7. ↑ M.コザック： 699脊椎動物メッセンジャーRNAからの5’ノンコーディングシーケンスの分析。 の： 核酸研究。 1987、バンド15、NR。 20、S。8125-48、 PMID 3313277 、 PMC 306349 （無料の全文）。
  8. ↑ T.ハミルトン、M。ノヴォトニー、P。J。Jr.パビシック、T。ヘルジャン、J。ハートピー、D。サン、C。ザオ、S。ダッタ： 好中球化学誘引剤サイトカイン遺伝子発現の転写後制御における多様性。 の： サイトカイン。 2010、バンド52、NR。 1-2、S。116-22、 PMID 20430641 、 PMC 2919655 （無料の全文）。
  9. ↑ E. Kotsopoulou、V。N。Kim、A。J。Kingsman、S。M。Kingsman、K。A。Mitrophanous： コドンが最適化されたHIV-1 GAG-POL遺伝子を利用するREV非依存性ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）ベースベクター。 の： Journal of Virology。 2000、バンド74、nr。 10、S。4839-4852、 PMID 10775623 、 PMC 112007 （無料の全文）。

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