Hình ảnh tương phản pha đại diện của các tế bào LNCaP. Thanh tỷ lệ đại diện cho 100 Pha.

Thuộc tính của các dòng tế bào PCa thông thường

Các tế bào LNCaP là một dòng tế bào của các tế bào người thường được sử dụng trong lĩnh vực ung thư. Các tế bào LNCaP là các tế bào adenocarcinoma tuyến tiền liệt nhạy cảm với người androgen có nguồn gốc từ di căn hạch bạch huyết trái từ một người đàn ông da trắng 50 tuổi vào năm 1977. Chúng là các tế bào biểu mô kết dính phát triển trong các tập hợp và như một tế bào đơn lẻ. ^[1]

Nghiên cứu về ung thư tuyến tiền liệt (PCa) có liên quan đến lâm sàng nhất là thiếu các dòng tế bào bắt chước tiến triển bệnh của con người. ^[2] Hai dấu hiệu của ung thư tuyến tiền liệt ở người di căn bao gồm sự thay đổi của PCa xâm lấn từ nhạy cảm androgen sang nhạy cảm với androgen (AI) trạng thái và xu hướng PCa di căn vào xương. ^[3] Mặc dù việc tạo ra các dòng tế bào AI đã khá thành công như đã được chứng minh trong các dòng tế bào cổ điển của DU145 và PC3, hành vi của các tế bào này trong xương không bắt chước hoàn toàn bệnh lâm sàng ở người. Người ta cũng xác định rằng di căn xương PCa ở người hình thành các tổn thương nguyên bào xương chứ không phải là tổn thương hủy xương được thấy trong các bệnh ung thư khác như ung thư vú. ^[4][5] Tương tự, các tế bào PC-3 và DU145 hình thành các khối u xương. Để phát triển một mô hình tế bào AI-PCa mô phỏng gần hơn bệnh lâm sàng, các dòng con LNCaP đã được tạo ra để cung cấp các công cụ nuôi cấy mô phù hợp nhất về mặt lâm sàng cho đến nay.

Lịch sử [ chỉnh sửa ]

Dòng tế bào LNCaP được thành lập từ một tổn thương di căn của ung thư tuyến tiền liệt ở người. Các tế bào LNCaP phát triển dễ dàng trong ống nghiệm (lên đến 8 x 10 ⁵ tế bào / m2; thời gian nhân đôi, 60 giờ), hình thành các dòng vô tính và có khả năng kháng cao với interferon nguyên bào sợi của con người. ^[1] số lượng nhiễm sắc thể phương thức từ 76 đến 91, biểu thị kiểu nhân của con người với một số nhiễm sắc thể đánh dấu. ^[1] Các đặc tính ác tính của các tế bào LNCaP được duy trì ở chuột khỏa thân phát triển khối u ở vị trí tiêm và hiển thị thời gian nhân đôi tương tự in vivo . ^[1]

Các thụ thể androgen và estrogen đặc hiệu có ái lực cao có mặt trong cytosol và các phân tử hạt nhân. ^[1] Dòng LNCaP có khả năng đáp ứng nội tiết tố, được thể hiện bởi in vitro Điều chế tăng trưởng tế bào và sản xuất phosphatase axit. ^[1] Các tế bào LNCaP cũng biểu hiện Kháng nguyên đặc hiệu tuyến tiền liệt (PSA). ^[1] In vivo chuột đực phát triển khối u sớm hơn và với tần suất lớn hơn so với con cái và thao tác nội tiết tố cho thấytần số phát triển khối u tương quan với nồng độ androgen trong huyết thanh. ^[1] Tuy nhiên, tốc độ phát triển của khối u không phụ thuộc vào tình trạng giới tính hay nội tiết tố của vật chủ. ^[1]

C4 / C5 và C4-2 [ chỉnh sửa ]

Wu et al. (1994) đã tái tạo các khối u LNCaP có nguồn gốc từ người ở chuột bị suy giảm miễn dịch bằng cách tiêm các tế bào LNCaP với các nguyên bào sợi xương của con người. ^[6] Các tế bào được tiêm dưới da vào nhiều vị trí vào sườn chuột và sau khoảng 4 tuần tăng trưởng. Có thể dễ dàng phát hiện bằng cách kiểm tra thể chất và có tốc độ tăng trưởng cao (17-33 mm3 / ngày). ^[6]

Để tái tạo sự thay đổi đặc trưng của các tế bào PCa sang AI, chuột chủ LNCaP đã bị thiến bằng cách rạch giữa khoảng 8 tuần chích thuốc. Các khối u được duy trì trong vật chủ bị thiến trong 4 đến 5 tuần tại thời điểm các khối u còn lại được thu hoạch. Tổng cộng, hai tập hợp các tế bào đã được thu thập từ các vật chủ bị thiến: C4 và C5, được thu thập lần lượt sau 4 và 5 tuần. ^[6]

Để tiếp tục chọn các tế bào AI-PCa, dòng con C4 được tiêm cùng với nguyên bào sợi MS vào chủ nhà thiến. Các khối u kết quả đã được phân lập và tạo ra một dòng con bổ sung, C4-2. ^[6]

So sánh Karyotype chỉ ra rằng Các tế bào LNCaP được nuôi cấy trong các vật chủ nguyên vẹn (tuyến phụ M) có số phân bố nhiễm sắc thể phương thức là 83, C4 và C5 với 85, và phân nhóm C4-2 với 83. ^[6]

Để xác minh thêm rằng các tế bào này có phân tích karyotype gốc của con người xác định rằng các tế bào LNCaP của cha mẹ có 7 nhiễm sắc thể đánh dấu riêng biệt, với hai bản sao của mỗi tế bào. Các dòng con M, C4, C5 và C4-2 chứa hầu hết các nhiễm sắc thể đánh dấu, với dòng con M tương tự như các tế bào LNCaP của cha mẹ. C4, C5 và C4-2 chỉ khác biệt nhỏ so với LNCaP và phân nhóm M với việc bổ sung nhiễm sắc thể đánh dấu do sự bổ sung phân đoạn vào nhiễm sắc thể 6. Nhiễm sắc thể không có trong hầu hết các tế bào C4, C5 và C4-2, cho thấy sự thay đổi nhiễm sắc thể chính. ^[6]

Các dòng con C4, C5 và C4-2 phát triển tốt trong điều kiện nuôi cấy mô giống hệt như LNCaP với tốc độ tăng trưởng tương tự. Các dòng con LNCaP, M, C4 và C5 của cha mẹ có mức biểu hiện gen cơ sở tương tự của ornithine decarboxylase (ODC) và Kháng nguyên đặc hiệu tuyến tiền liệt (PSA), tuy nhiên, các dòng phụ M, C4 và C5 biểu hiện thêm mRNA PSA gấp 5-10 lần. M, C4, C5 và C4-2 cũng biểu hiện giảm mRNA của thụ thể androgen ở người như mong đợi trong các tế bào AI. ^[6]

Không nhạy cảm với Androgen Tất cả các dòng con được điều trị bằng dihydrotestosterone (DHT), một phối tử có ái lực cao đối với AR. Điều trị bằng DHT đã gợi ra sự tăng trưởng rõ rệt ở các tế bào C4 và C5 và không tăng trưởng trong các tế bào C4-2 khi so sánh với tốc độ tăng trưởng cao được thấy trong các tế bào LNCaP, cho thấy giảm độ nhạy androgen ở các tế bào C4 và C5 và AI trong các tế bào C4-2. Xét nghiệm AR toàn tế bào cũng chỉ ra rằng các tế bào LNCaP có dạng AR có ái lực cao hơn nhiều (Kd = 159 pM) khi so sánh với C4-2 (Kd = 267 pM). ^[6]

Tumorigenomatic Các dòng con C4 và C5 biểu hiện tăng độc tính khối u khi tiêm vào chuột đực còn nguyên vẹn, không giống như các tế bào LNCaP của cha mẹ. C4 và C5 cũng có thể tạo thành ung thư biểu mô mạch máu cao ở chuột bị thiến khi được tiêm cùng với nguyên bào sợi của người MS. Subline C4-2 dễ dàng hình thành khối u trong các vật chủ nguyên vẹn hơn so với các dòng con C4 và C5 và chúng là những tế bào duy nhất có thể hình thành khối u trong vật chủ bị thiến mà không cần tiêm cùng với nguyên bào sợi xương của MS. Các khối u C4-2 tương tự được nhuộm cho PSA và tiết ra mức PSA cao vào môi trường phát triển. ^[6]

Để tạo ra một tuyến dưới di căn xương, các tế bào C4-2 được tiêm trực tiếp vào chuột đực bị thiến. Những tế bào này hình thành các khối u nguyên phát lớn của tuyến tiền liệt, các hạch bạch huyết, cũng như các khối u osseus. Việc cách ly các khối u osseus này dẫn đến đường con C4-2B. Các tế bào C4-2B dương tính với PSA và cytokeratin 8, xác nhận nguồn gốc tuyến tiền liệt của chúng. Quan trọng nhất, nhuộm hóa mô miễn dịch của các khối u C4-2B là dương tính đối với hoạt động hủy xương cho thấy sự hình thành khối u nguyên bào xương phản ánh sự tiến triển của PCa ở người. ^[2]

Khi nuôi cấy trong môi trường nuôi cấy tế bào gốc có chứa axit ascorbic giống như sự hình thành ECM trong các nguyên bào xương) và một nguồn phốt phát (để hình thành hydroxyapatite), các tế bào C4-2B sản xuất và giữ lại lượng canxi khoáng hóa nhiều hơn khoảng 8 lần so với tế bào LNCaP của cha mẹ. Các tế bào C4-2B cũng thể hiện mức độ cao hơn của Osteoprotegerin (OPG), phosphatase kiềm, sialoprotein xương (BSP), Osteocalcin (OCN), RANKL và Osteonectin (OSN) mRNA, tất cả đều được biểu hiện cao bởi Osteoblasts. Hoạt động của trình khởi động Osteoblast cũng cao hơn trong các tế bào C4-2B khi so sánh với LNCaP, như được biểu thị bằng biểu thức yếu tố phiên mã Cbfa1. Đồng thời, BMP7, một chất cảm ứng được biết đến của Cbfa1, cũng được thể hiện cao hơn trong các tế bào C4-2B, gợi ý thêm nhiều đặc tính giống như nguyên bào xương. ^[5]

Biến thể độc lập Androgen [ chỉnh sửa Các tế bào LN95 có nguồn gốc từ LNCaP được nuôi cấy trong RPMI-1640 (không có phenol đỏ) với huyết thanh bào thai 10% được bóc vỏ bằng than. ^[7] Các tế bào LN95 khác với các tế bào LNCaP của cha mẹ. , với biểu hiện biến thể thụ thể Androgen tương tự như AR-V7 ^Cao Các tế bào VCaP. ^[8] Đáng chú ý, các tế bào LN95 có khối u khởi phát nhiều hơn đáng kể so với các đối tác của cha mẹ trong vivo . ] Các tế bào LNCaP-AI (hoặc LN-AI) được lấy từ nuôi cấy tế bào gốc LNCaP 6 tháng trong huyết thanh tước than. ^[9] Trong khi LNCaP-AI độc lập hoàn toàn với androgen, chúng vẫn giữ được biểu hiện cao của thụ thể Androgen, biểu hiện thấp của AR-V7 và vẫn còn androgen đáp ứng. ^[8] Cơ chế của kiểu hình tăng sinh cao của các tế bào LNCaP-AI dường như bị mất biểu hiện điều hòa chu kỳ tế bào (p21, p16) và tăng biểu hiện Bcl2 chống apoptotic. ^[9][10]

chỉnh sửa ]

Đọc thêm [ chỉnh sửa ]

Liên kết ngoài [ chỉnh sửa ]